???????? 液相色譜是世界各地實驗室使用的流行純化技術(shù)。如果系統(tǒng)設(shè)置和操作正確，它可以立即從混合物中分離出所需的化合物。學(xué)習(xí)如何使用和制備緩沖液和溶劑是能提高系統(tǒng)性能的重要技巧之一。準(zhǔn)確制備和正確選擇緩沖液對于在液相色譜中獲得可重復(fù)的結(jié)果至關(guān)重要。
????????? 一、了解您的化合物
????????? 如果您正在尋找混合物中的特定化合物，您應(yīng)該使用最能將您的分析物與其他分析物分開的緩沖液/溶劑組合。例如，了解極性和溶解度（極性或非極性）、電離、您正在尋找的紫外吸光度將有助于指導(dǎo)您使用特定的色譜柱和溶劑組。
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????????? 二、純度
???????? 使用較低等級且成本較低的試劑來制作緩沖液以節(jié)省一些錢是很誘人的，但從長遠(yuǎn)來看，它最終會變得更加昂貴。與含有最少或不含雜質(zhì)的 HPLC 級試劑相比，純度較低的試劑會導(dǎo)致不需要的峰和嘈雜的基線。它們還會對您的系統(tǒng)造成嚴(yán)重破壞，造成阻塞，從而導(dǎo)致系統(tǒng)故障和更昂貴的維護費用。所有試劑和溶劑，包括您使用的水，都應(yīng)該是最高質(zhì)量的 HPLC 級，以減少緩沖液中不需要的微粒。高級試劑的成本可能比低級試劑略高，但純度的差異是值得的。HPLC 級試劑還有助于獲得更一致的結(jié)果并保持系統(tǒng)平穩(wěn)運行。
??????? 即使是使用高純度實驗級別的溶劑，也需要在進入色譜系統(tǒng)前進行過濾，采用恒譜生溶劑過濾器可以有效過濾化學(xué)污染等雜質(zhì)進入系統(tǒng)，通用于流動相或輸液泵，配套用于外徑1/8英寸或1/16英寸的管子，放置于流動相溶劑瓶中，過濾雜質(zhì)。過濾后，溶劑應(yīng)儲存在有蓋的容器中，以防止被灰塵或其他不需要的材料污染。
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?????????? 四、避免氣泡
??????? 在與您的系統(tǒng)一起使用之前對緩沖液進行脫氣或真空過濾可以最大限度地減少流動相中的空氣和微粒。如果液相色譜系統(tǒng)中發(fā)生流動相脫氣，主要會影響泵和檢測器。為了解決這個問題，在將新制備的流動相泵入 HPLC 系統(tǒng)之前進行脫氣，連同在線脫氣器，應(yīng)徹底脫氣以去除所有溶解的氣體。最有效的脫氣形式是用氦氣或其他低溶解度氣體鼓泡。如果該方法可用，建議在整個分析過程中以非常低的水平持續(xù)對流動相進行脫氣。
??????? 五、定期檢查
???????? 細(xì)菌幾乎可以在任何溶液中適應(yīng)和生長，甚至是有機溶劑，具體取決于濃度。為防止細(xì)菌生長堵塞色譜柱篩板，每次制備新的緩沖液批次時更換緩沖液容器，檢查緩沖液瓶/袋是否有細(xì)菌生長跡象。搖晃或攪拌時出現(xiàn)渾濁的溶液應(yīng)丟棄。使用抑菌劑（例如 0.02% 疊氮化鈉）處理會延長溶液的儲存時間，盡管這些試劑可能會影響您的色譜圖。
??????? 六、新鮮配置
??????? 恒譜生建議稀釋緩沖液的有效期為一周。這種做法可確保緩沖液的 pH 值不受長期儲存的影響，并且不會出現(xiàn)微生物生長。pH 值變化和微生物生長都會影響您的色譜運行并導(dǎo)致運行之間的不一致。雖然您可以添加穩(wěn)定劑，例如焦亞硫酸鈉，但這些試劑會影響光學(xué)和色譜結(jié)果。
??????? 最后，液相色譜法可能是一項具有挑戰(zhàn)性的技術(shù)。遵循上述關(guān)于如何準(zhǔn)備和使用緩沖液進行純化的提示，將有助于使每次運行的一致性和可重復(fù)性。
發(fā)布于: 2022-04-01